NETs/NETosis的非腫瘤課題如何設計？這篇近40分文章給你答案
撰寫(xiě)：科研小迪 來(lái)源：小張聊科研平臺的“ 課題指南針”*，*搜刮“ 課題指南針”即可存眷/掃描存眷見(jiàn)文末
#國天然# #科研熱點(diǎn)# #課題思緒#
今天向各人分享一篇頒發(fā)于《Circulation》（IF=*9.918，JCR分區=Q1）的文章，其名為：“Oxidized phospholipids promote NETosis and arterial thrombosis in LNK(SH2B*) deficiency”。
過(guò)往的研究顯示：1）LNK/SH2B2按捺Janus激酶/信號轉導及信號激活因子（Janus kinase/signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）信號通路；2）據全基因組聯(lián)系關(guān)系研究（genome-wide association study，GWAS），LNK（R2*2W,T等位基因）的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）與中性白細胞增加癥(neutrophilia)、血小板增加癥（thrombocytosis）和冠狀動(dòng)脈疾?。╟oronary artery disease）親近相關(guān)；*）LNK（TT）招致LNK功用下降，且LNK缺乏的小鼠顯示明顯的血小板-中性粒細胞聚集、加速動(dòng)脈粥樣硬化和血栓構成；和4）血小板-中性粒細胞的交互感化促進(jìn)中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophil extracellular trap，NETs）構成。在之前的研究根底之上，此研究的目標為評估NETs調理造血Lnk缺乏小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化和血栓構成。接下來(lái)，我們分享做者是若何展開(kāi)研究的。
研究摘要
1.Lnk缺乏的小鼠顯示頸動(dòng)脈血栓加速且構成NET（即NETosis），但缺乏肽基精氨酸脫氨基酶（peptidyl arginine deminase，PAD4）不會(huì )完全逆轉NETosis。
2.比照于野生型（wide-type，WT）血小板/中性粒細胞，凝血酶激活的Lnk-/-血小板與Lnk-/-中性粒細胞孵育后促使NETosis增加。
*.Lnk-/-血小板外表表露增加且氧化磷脂（oxidized phospholipids，OxPL）釋放增加，且Lnk-/-中性粒細胞對OxPL的啟動(dòng)和反響加強。
4.E0*的單鏈可變片段（single-chain variable fragment of E0*，E0*-scFv）逆轉Lnk-/-小鼠NETosis加速、動(dòng)脈粥樣硬化及血栓構成。
5.人誘導多能干細胞（induced pluripotent stem cells，iPS）來(lái)源LNK(TT)嗜中心粒細胞與LNK(TT)血小板/巨核細胞孵育后，NETosis增長(cháng)。
*.Biobank的數據成果表白，照顧突變JAK2VF且LNK R2*2W等位基因的人群患冠狀動(dòng)脈疾病的風(fēng)險升高。
7.比照于Jak2VFLnk+/+對照組，造血Lnk+/-及JAK2VF克隆性造血（clonal hematopoiesis,CH）小鼠的動(dòng)脈血栓構成加速。
8.本研究強調：
1）造血的Lnk缺乏依賴(lài)OxOL促進(jìn)NETosis和動(dòng)脈血栓構成；
2）LNK(R2*2R)使人類(lèi)血小板和中性粒細胞中的LNK功用下降，從而促進(jìn)NETosis；同時(shí)，其增加Jak2VF突變人群患冠狀動(dòng)脈疾病的風(fēng)險；
*）靶向OxDL有益于治療遺傳限制人群的冠狀動(dòng)脈疾病。
研究思緒
研究?jì)热?/p>
1.PAD4缺乏逆轉Lnk-/-小鼠NETs和動(dòng)脈血栓構成
造血的PAD4缺乏逆轉Lnk-/-骨髓受體者的加速血栓構成，但不影響Lnk+/+受體者（圖A）。類(lèi)似于PAD4缺乏，損耗嗜中心粒細胞顯著(zhù)耽誤Lnk-/-小鼠的血栓構成時(shí)間（time to occlusion，TTP）（圖B），其表示中性粒細胞PAD4促進(jìn)Lnk缺乏的NETosis?？ㄋ顾R斯（Carstairs）染色和組卵白H*染色的成果顯示，PAD4的缺乏完全逆轉Lnk-/-小鼠血栓中NETs增長(cháng)7倍（圖C）。綜上所述，NETosis依賴(lài)PAD4，促進(jìn)造血LNK缺乏、高膽固醇血癥的小鼠動(dòng)脈血栓構成。
2.基于血小板活化因子受體，血小板釋放的血小板激活因子（platelet-activating factor，PAF）樣OxPL誘導Lnk-/-嗜中性粒細胞中的NET
Lnk-/-血小板與Lnk-/-中性粒細胞孵育時(shí)，NETs顯著(zhù)增加（圖A）。從活化的血小板中造備上清液的成果顯示，完好的Lnk-/-血小板或其上層清液顯示類(lèi)似的活性，然而野生型血小板的Lnk-/-清液促進(jìn)NETosis下調（圖B）。不只如斯，比照于Lnk+/+血小板，從Lnk-/-血小板提取出的脂類(lèi)誘導顯著(zhù)高程度的NETosis（圖B）。別的，通過(guò)PAF受體的PAF樣連系活性（PAF-like agonistic activity through the PAF receptor，OxPAPC）誘導Lnk-/-中NETosis，且WEB208*障礙OxPAPC誘導NETosis（圖C）。綜上所述，Lnk-/-釋放的PAF樣脂量通過(guò)激活Lnk-/-嗜中性粒細胞中的PAFR（PAF receptor，PAF受體）促進(jìn)NETosis。
*.E0*-scFv逆轉Lnk-/-小鼠中NET和動(dòng)脈血栓構成
E0*-scFv轉基因幾乎完全逆轉Lnc缺乏的雌性小鼠血栓構成加速（下圖A），在雄性小鼠中也察看到類(lèi)似的成果（下圖B）。與此同時(shí)，E0*-scFv逆轉Lnk-/-小鼠的血栓中增長(cháng)的NETosis（下圖C）。比擬于對照組，血清OxPL程度在雄性和雌性高膽固醇癥LNK缺乏的小鼠中顯著(zhù)升高（下圖D）。流式細胞術(shù)成果顯示，比照于WT血小板，凝血酶激活后Lnk-/-血小板中E0*-scFv與血小板的連系顯著(zhù)增加（下圖E）。E0*-scFv逆轉高膽固醇癥LNK缺乏，顯著(zhù)進(jìn)步血漿p-選擇素（下圖F）。卵白酶激活受體4（protease-activated receptor 4，PAR4）沖動(dòng)劑治療后，Lnk-/-血小板中外表p-選擇素程度和活化的整合素αIIbβ*程度顯著(zhù)升高，而E0*-scFv小鼠中那些增長(cháng)顯著(zhù)降低（下圖GH）。在E0*-scFv的影響下，p-選擇素表露顯著(zhù)削減（下圖I）。
E0*-scFv逆轉LNK缺乏小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變中明顯的NETosis（下圖A）。雄性和雌性的LNK缺乏小鼠中，病斑面積和壞死核心區均顯著(zhù)增加（下圖BC）。綜上所述，E0*-scFv 在病變晚期時(shí)有效于治療NET和動(dòng)脈血栓構成。
4.粒細胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF）促進(jìn)LNK缺乏小鼠NETosis
經(jīng)G-CSF處置后，瓜氨酸化組卵白（citrullinated histone，H*Cit）程度在Lnk-/- 中性粒細胞中顯著(zhù)升高（圖A）。G-CSF刺激招致WT和Lnk-/- 細胞中NETosis劑量依賴(lài)性增加，但Lnk-/- 細胞強度更高（圖B）。別的，G-CSH介導的啟動(dòng)效應顯著(zhù)增加，招致Lnk-/- 中性粒細胞中NETosis明顯增加（圖CE）。綜上所述，G-CSF介導的啟動(dòng)效應加強，也許招致Lnk-/- 嗜中心粒細胞NETosis增加。
5.人誘導多能干細胞衍生的LNK（TT）細胞中血小板活化加強、STAT信號變多和NETosis增加
LNK(TT) 巨核細胞（megakaryocyte，MMK）/血小板復合物顯示，比照于LNK(TT)對照組，外表p-選擇素程度在根底和刺激前提下顯著(zhù)升高（圖A）。LNK(TT)中性粒細胞培育于包羅G-CSF的培育基中，此中p-STST5顯著(zhù)升高（圖B）。孵育LNK(TT) 中性粒細胞和LNK(TT) MMK/血小板時(shí)，會(huì )顯著(zhù)增加NETosis（圖C），且PAF刺激顯著(zhù)進(jìn)步LNK(TT)的NETosis（圖D）。
*.Jak2VFLnk+/–小鼠中NET增加和血栓構成加速
PAR4沖動(dòng)劑激活*周或10周西式飲食（western-type diet，WTD）后，外表p-選擇素程度顯著(zhù)增加（圖AB）。比照于Jak2VFLnk+/+小鼠，Jak2VFLnk+/–小鼠的動(dòng)脈血栓構成顯著(zhù)加速（圖C），且NET顯著(zhù)增加（圖D）。NETs在Jak2VFLnk+/–小鼠的病灶中更為顯著(zhù)（圖F），Jak2VFLnk+/–組和Jak2VFLnk+/+組中，動(dòng)脈粥樣硬化病變的大小和壞死的核心區域無(wú)顯著(zhù)不同（圖E）。
研究在臨床上的最新動(dòng)靜及其意義
最新動(dòng)靜：
1）LNK（R2*2W）中一種常見(jiàn)的遺傳性變型降低其功用且促進(jìn)JAK/STAT信號傳導，其與冠狀動(dòng)脈疾病有關(guān)。
2）人誘導多能干細胞衍生的血小板和中性粒細胞照顧LNK（R2*2W），其產(chǎn)生增加的NET。高脂血癥的LNK缺乏的小鼠顯示NETs和動(dòng)脈血栓顯著(zhù)增加，但可被OxPL抗體逆轉。
*）LNK（R2*2W）增加照顧JAK/STAT信號功用（JAK2VF）的人群患冠狀動(dòng)脈疾病的風(fēng)險，促進(jìn)LNK缺乏的小鼠NETosis和動(dòng)脈血栓構成，并表示靶向照顧LNK功用缺失變異的患者的 NETosis和OxPL可能降低動(dòng)脈粥樣硬化血栓構成的風(fēng)險。
臨床意義：
1）關(guān)于造血Lnk缺乏的高膽固醇血癥小鼠，其動(dòng)脈血栓構成加速，且血栓中NETs增加；那些變革被PAD4缺乏/OxPL抗體逆轉。
2）當被激活時(shí)，高血脂小鼠中LNK缺乏的血小板表露，且釋放的OxPL增加；當與Lnk缺乏的中性粒細胞一路孵育時(shí)，會(huì )促進(jìn)NETosis。
*）抗OxPL抗體降低LNK缺乏的小鼠中血漿OxPL的程度，按捺NETosis和動(dòng)脈血栓構成。
4）利用OxPL抗體靶向動(dòng)脈粥樣化血栓構成的風(fēng)險出格有效于治療LNK功用降低或JAK/STAT信號增加的遺傳限制的人群。
文章小評
為確認Lnk缺乏以依賴(lài)OxOL的體例促進(jìn)NETosis和動(dòng)脈血栓構成，且靶向OxDL有益于治療冠狀動(dòng)脈疾病，做者通過(guò)動(dòng)物嘗試，驗證了分子機造以及其在臨床上的重要意義。然而，1）貧乏臨床試驗驗證研究成果有利于治療冠狀動(dòng)脈疾病患者；2）該研究涉足Lnk，但較少地納入其他影響NETosis和動(dòng)脈血栓構成的細胞分子；*）除冠狀動(dòng)脈疾病外，Lnk能否有助于治療其他的疾病，那需要更多的研究。
021yin.com/s/G_k-TG_MmWbH2rxJV7QyAQ
